暗視野顯微鏡又被稱作暗場顯微鏡，是一種通過觀察樣品受側(cè)向光照射時所產(chǎn)生的散射光來分辨樣品細節(jié)的顯微鏡。 暗視野顯微鏡適用于檢查未染色標本的形態(tài)及其運動能力。

原理和結(jié)構(gòu)特點：

暗視野顯微鏡和普通的明視野顯微鏡區(qū)別在于它們的聚光器有所不同。暗視野顯微鏡裝有一個*遮暗的聚光器，使光線不能通過聚光器，而只能從聚光器四周及未遮暗的部位斜射到載玻片的標本上。同時因光線是斜射的，不能進入物鏡，而使得觀察的視野也是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線，則因光的散射作用而使菌體發(fā)亮，再反射至物鏡內(nèi)，這樣在顯微鏡中則可見到暗視野中明亮的影像。

操作方法：

1）使用研究級暗視野顯微鏡，或?qū)⑵胀ü鈱W(xué)顯微鏡上的聚光器取下來，裝上暗場聚光器；

2）不論使用的是干燥物鏡還是油浸物鏡，在進行鏡檢時都應(yīng)在聚光器的上透鏡上，加上一滴香柏油；

3）將制作好的細菌懸滴標本片放置于載物臺上，然后上升聚光器至頂部，使油與載玻片相接觸；

4）放大光源；

5）進行聚光器光軸調(diào)節(jié)及調(diào)焦；首先用10×物鏡找到被檢物像，然后調(diào)小聚光器虹彩光圈，直至可在視野中看到視場光闌的輪廓，再上下細致調(diào)整聚光器，這樣會使視場光闌的影像變得更為清晰，同時，如視場光闌不在場*，則可利用聚光器外側(cè)的兩個調(diào)節(jié)鈕進行調(diào)整，當亮光點到達場*后，再將其調(diào)大，方可進行觀察。

注意事項：

1）暗視野觀察所用物鏡的數(shù)值孔徑一般適宜在1.00—1.25左右，建議使用帶視場光闌的物鏡，通過隨意轉(zhuǎn)動物鏡中部的調(diào)節(jié)環(huán)，可輕松改變數(shù)值孔徑的大小。

2）更要求使用的載玻片和蓋玻片必須無劃痕、無灰塵，且物鏡前透鏡也必須潔凈無塵。同時載玻片與蓋玻片的厚度也應(yīng)符合標準。

3）鏡檢時室內(nèi)的光線應(yīng)較暗，如果達不到這樣的條件，也應(yīng)盡量使用遮光裝置，以更好的阻止目鏡周圍有光線射入。

4）在進行油鏡的鏡檢時，由于油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡產(chǎn)生的漫反射，可能會影響視場的鏡檢效果，所以必須盡量先清除掉油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡等。

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